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人接触蛋白4(CNTN4)elisa试剂盒
  • 英文名称:Human Contactin 4/CNTN4 kit
  • 品牌:卡凯希
  • 产地:上海
  • 型号:96T/48T
  • 货号:KKX-16563R
  • 价格: ¥1200/盒
  • 发布日期: 2024-09-25
  • 更新日期: 2024-11-04
产品详请
产地 上海
保存条件 2-8℃
品牌 卡凯希
货号 KKX-16563R
用途 科研实验
检测方法 酶联免疫法
保质期 6个月
适应物种 人,鼠,,植物,昆虫,微生物,牛,马,羊,鹅,犬,鸡,鸭,鱼,兔,猴等
检测限 详见说明书
数量 116
英文名称 Human Contactin 4/CNTN4 kit
包装规格 96T/48T
标记物 HRP标记物
样本 血清,血浆细胞,组织,等相关液体
应用 详见说明书
是否进口

产品名称/贷号/CAS:KKX-16563R

英文名称:Human Contactin 4/CNTN4 kit

检测原理

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被(ALDH1)抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并洗涤。用底物TMB显色,TMB在化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的谷氨酸(ALDH1)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值)。

样品收集、处理及保存方法

  1. 血清

    • 使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激。
    • 收集血液后,3000转/分离心10分钟,将血清和红细胞迅速小心地分离。
  2. 血浆

    • EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。
    • 3000转/分离心30分钟取上清。
  3. 细胞上清液

    • 3000转/分离心10分钟去除颗粒和聚合物。
  4. 组织匀浆

    • 将组织加入适量生理盐水捣碎。
    • 3000转/分离心10分钟取上清。
  5. 保存

    • 如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20°C,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

自备物品

  1. 酶标仪(450nm)
  2. 高精度加样器及枪头:0.5-10μL、2-20μL、20-200μL、200-1000μL
  3. 37°C恒温箱

操作注意事项

  1. 保存与平衡

    • 试剂盒应保存在2-8°C,使用前需在室温下平衡20分钟。
    • 从冰箱取出的浓缩洗涤液可能会有结晶,这属于正常现象,可通过水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
  2. 板条保存

    • 实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。
  3. 标准品与样本稀释

    • 浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或空白。
    • 按照说明书操作时,样本已经稀释5倍,最终结果需乘以5才是样本的实际浓度。
  4. 严格按照操作时间与顺序

    • 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
  5. 充分摇匀液体组分

    • 所有液体组分使用前应充分摇匀。

试剂盒组成

名称 96孔配置 48孔配置 备注
微孔酶标板 12孔×8条 12孔×4条
标准品 0.3mL×6管 0.3mL×6管
样本稀释液 6mL 3mL
检测抗体-HRP 10mL 5mL
20×洗涤缓冲液 25mL 15mL 按说明书进行稀释
底物A 6mL 3mL
底物B 6mL 3mL
终止液 6mL 3mL
封板膜 2张 2张
说明书 1份 1份
自封袋 1个 1个

试剂的准备

  • 20×洗涤缓冲液的稀释
    • 蒸馏水按1:20稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。

洗板方法

  1. 手工洗板

    • 甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1分钟,甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板5次。
  2. 自动洗板机

    • 每孔注入洗液350μL,浸泡1分钟,洗板5次。

操作步骤

  1. 从室温平衡20分钟后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4°C。
  2. 设置标准品孔和样本孔
    • 标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
    • 样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;空白孔不加。
  3. 加入检测抗体
    • 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37°C水浴锅或恒温箱温育60分钟。
  4. 洗涤
    • 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1分钟,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
  5. 加入底物
    • 每孔加入底物A、B各50μL,37°C避光孵育15分钟。
  6. 终止反应
    • 每孔加入终止液50μL,15分钟内在450nm波长处测定各孔的OD值。

结果判断

  • 绘制标准曲线:在Excel工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应OD值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算各样本浓度值。

试剂盒性能

  1. 准确性

    • 标准品线性回归与预期浓度相关系数 ( R ) 值大于等于0.9900。
  2. 灵敏度

    • 检测浓度小于1.0 mg/L。
    • 不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
  3. 重复性

    • 板内、板间变异系数均小于15%。
  4. 贮藏

    • 2-8°C,避光防潮保存。
  5. 有效期

    • 6个月

免责声明

  1. 试剂盒仅供研究使用,不得用于临床实验或实验,否则所产生的一切后果,由实验者承担,本公司概不负责。
  2. 严格按照说明书操作,实验者违反说明书操作,后果由实验者承担。
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