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检测原理:
采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被(CHIT1)抗体的包被微孔中,依次
加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻-底洗涤。用底物TMB显色,TMB在化物酶的催化下转化成蓝
色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中CHIT1)呈正相关。用酶标仪在450m波长
样品收集、处理及保存方法
1.样本不能含叠氮钠(NaN3),因为叠氮钠(NaN3)是辣根化物酶(HRP)的剂。
2.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行。
3.植物萃取液或其它相关样本:请1000×g离心20分钟,取上清即可检测。
4.保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分
解冻。
自备物品:
1.酶标仪(450nm)
2.高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.37℃恒温箱
操作注意事项:
(酶联免疫吸附测定)的基本使用方式可以概括为以下几个步骤:
样品准备与检测步骤
一、样品准备
收集样本
收集样本,如血液、组织、细胞培养上清液等。
按照试剂盒的指示处理样本,如离心、过滤、稀释或沉淀。
二、标准曲线
准备标准品
按照试剂盒提供的浓度梯度稀释标准溶液。
在微孔板的多个孔中加载标准品,通常是双倍稀释系列。
三、预包被
预包被
微孔板通常预先包被有特抗体,用于捕捉待测物质。
四、样品加载
样品加载
在微孔板的孔中加载样品和空白对照。
五、封闭
封闭
可能需要添加封闭剂以减少非特结合。
六、次孵育
次孵育
将微孔板在室温或37°C下孵育一段时间,让待测物质与包被抗体结合。
七、次洗涤
次洗涤
清洗微孔板以去除未结合的物质。
八、添加酶标记的抗体
添加酶标记的抗体
加入酶标记的抗体,它可以与步结合的抗原结合(在竞争法ELISA中,这可能是针对同一抗原的抗体)。
九、第二次孵育
第二次孵育
让酶标记的抗体与抗原结合。
十、第二次洗涤
第二次洗涤
清洗微孔板以去除未结合的酶标记抗体。
十一、添加底物溶液
添加底物溶液
加入底物,底物在酶的作用下会发生颜色变化。
十二、第三次孵育
第三次孵育
允许颜色发展到稳定的程度,时间根据试剂盒说明确定。
十三、终止反应
终止反应
加入终止液,停止颜色变化并稳定结果。
十四、读取吸光度
读取吸光度
使用酶标仪在特定波长(通常450nm,有时405nm或630nm)下读取吸光度。
十五、数据分析
数据分析。
试剂的准备:
20×洗涤缓冲液的稀释:蒸馏水按1:20稀释,即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
洗板方法:
1.手工洗板:甩尽孔内液体,每孔加满洗涤液,静置1mi后甩尽孔内液体,在吸水纸上拍干,如此洗板5次。
2.自动洗板机:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。
操作步紧:
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3.样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;空白孔不加。
4.除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加人辣根化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴
锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1in,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6.每孔加入底物A、B各50uL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的0D值。
结果判断
绘制标准曲线:在Ec工作表中,以标准品浓度作横坐标,对应0D值作纵坐标,绘制出标准品线性回归曲线,按曲线方程计算
各样本浓度值。
试剂盒性能:
1.抗体优势----、灵敏、特异
2.规范包被操作----吸附均匀,吸附性好,空白值低,孔底透明度高
3.先进的优化方案----重复性高,可靠性强
4.购买本公司的ELISA试剂盒,免费代测
5.技术服务要求:专业,规范,
6.适用于体液、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等多种类型的样本
7.可检测动物类型丰富:人、猴、大鼠、小鼠、豚鼠、黄金地鼠、兔、猪、犬、牛、绵羊、山羊、鹅、鸡、虾、河蟹、鲈鱼、斑马鱼等
8.可检测指标齐全:因子、生成素、因子、趋化因子、生长因子基质金属蛋白酶、脂肪因子等等
9.经济、实惠、可靠,完善、稳定的实验体系,的科研队伍,先进的实验设备、准确可靠的实验结果
安全性
1)避免直接接触停止液和底物A、B。一旦接触到这些液体,请赶快用水冲刷。
2)实验中不要吃喝、抽烟或运用化妆品。
3)不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。
**免责声明**
本ELISA试剂盒仅供科学研究使用,不适用于临床诊断或决策。用户在使用本产品时应具备相关的实验技能和知识,。在开始实验前,请仔细阅读并理解产品说明书和此免责声明。
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