采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被(betatrophin)抗体的包被微孔中，依次
加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻-底洗涤。用底物TMB显色，TMB在化物酶的催化下转化成蓝
色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中betatrophin)呈正相关。用酶标仪在450m波长
样品收集、处理及保存方法
1.样本不能含叠氮钠(NaN3),因为叠氮钠(NaN3)是辣根化物酶(HRP)的剂。
2.标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行。
3.植物萃取液或其它相关样本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测。
4.保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分
解冻。
自备物品：
仪器:分析天平、离心机、荧光 PCR 扩增仪、组织研磨器、-20 ℃冰箱、可调移液器(2 μL、20μL、200 μL、1000 μL)。
耗材:荧光 PCR 专用反应管、眼科剪、眼科镊、生理盐水、1.5 mL 经焦碳酸酯(DEPC)水处理的离心管、吸头(10 μL、200 μL、1000 μL)、双蒸水。
操作注意事项：

样品准备与检测步骤
一、样品准备
收集样本
收集血液样本，离心分离血清或血浆，并按照试剂盒的说明进行适当的稀释或处理。
二、标准曲线建立
标准曲线建立
使用试剂盒提供的标准品，按照的浓度梯度进行稀释，以建立吸光度与浓度的关系曲线。
三、预处理
预处理
可能需要对样品进行预处理，例如去除蛋白质或其他可能干扰检测的成分。
四、样品和标准品加载
样品和标准品加载
将样品和标准品加载到预包被有抗体的微孔板中。
五、次孵育
次孵育
在一定温度和时间下让样本和抗体结合。
六、次洗涤
次洗涤
使用洗板机或手动清洗微孔板，去除未结合的物质。
七、添加酶标记的抗体
添加酶标记的抗体
加入标记了酶的抗体，使其与步结合的抗原结合。
八、第二次孵育
第二次孵育
允许酶标记的抗体与抗原结合。
九、第二次洗涤
第二次洗涤
再次清洗微孔板以去除未结合的酶标记抗体。
十、添加底物溶液
添加底物溶液
加入底物，底物在酶的作用下会发生颜色变化。
十一、第三次孵育
第三次孵育
让反应进行到一定时间，颜色变化达到稳定。
十二、终止反应
终止反应
加入终止液，停止颜色变化。
十三、读取吸光度
读取吸光度
使用酶标仪或微孔板读取器在波长下测量每个孔的吸光度。
十四、数据分析
数据分析
根据标准曲线计算样品中待测物质（如ucOC）的浓度。

20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
洗板方法：
1.手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1mi后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。
2.自动洗板机：每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。
操作步紧：
1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3.样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;空白孔不加。
4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加人辣根化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔，37℃水浴
锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1in,甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50uL,37℃避光孵育15min。
7.每孔加入终止液50μL,15min内，在450nm波长处测定各孔的0D值。
结果判断
绘制标准曲线：在Ec工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应0D值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算
各样本浓度值。
试剂盒性能：

1.抗体优势----、灵敏、特异
2.规范包被操作----吸附均匀,吸附性好,空白值低,孔底透明度高
3.先进的优化方案----重复性高,可靠性强
4.购买本公司的ELISA试剂盒,免费代测
5.技术服务要求:专业,规范,
6.适用于体液、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等多种类型的样本
7.可检测动物类型丰富:人、猴、大鼠、小鼠、豚鼠、黄金地鼠、兔、猪、犬、牛、绵羊、山羊、鹅、鸡、虾、河蟹、鲈鱼、斑马鱼等
8.可检测指标齐全:因子、生成素、因子、趋化因子、生长因子基质金属蛋白酶、脂肪因子等等
9.经济、实惠、可靠,完善、稳定的实验体系,的科研队伍,先进的实验设备、准确可靠的实验结果
安全性
1)避免直接接触停止液和底物A、B。一旦接触到这些液体,请赶快用水冲刷。
2)实验中不要吃喝、抽烟或运用化妆品。
3)不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。