1.从室温平衡20mi后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4°℃。
2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3.样本孔中加入待测样本50μL;空白孔不加。
4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液(350μL),静置1mi,甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6.每子孔加入底物A、B各50μL,37°C避光孵育15min。
7.每子孔加入终止液50uL,15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
除标准品外4℃保存6个月内有效标准品4°℃保存，1-2周内有效，-20°℃保存11个月内有效由于标准品一般是冻干粉，在制备后需要严格校准，
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