• 产品名称：犬素A2 (TX-A2) ELISA试剂盒
• 英文名称：Canine Thromboxane A2 (TX-A2) ELISA Kit
• 品牌：卡凯希

产品特性

• 检测原理：采用双抗体一步夹心法ELISA技术。
• 样本类型：适用于犬类的血清、血浆等样本。
• 规格：提48T/96T
• 储存条件：2-8°C避光保存。
• 有效期：6个月。
• 特点：高灵敏度、特异性强、重复性好。

使用方法

• 样本准备：根据说明书要求准备样本。
• 标准品配制：按照说明书指示配制不同浓度的标准品。
• 样本加样：将标准品和待测样本加入到预先包被有特异性抗体的微孔板中。
• 温育：在规定条件下进行温育，使样本中的TX-A2与包被抗体结合。
• 洗涤：去除未结合的成分。
• 加入酶标记的检测抗体：使结合的TX-A2与酶标记的抗体进一步结合。
• 再次温育：确保充分结合。
• 再次洗涤：去除未结合的酶标记抗体。
• 加入底物显色：加入显色剂，观察颜色变化。
• 终止反应：加入终止液终止显色反应。
• 读取吸光度值：在指定波长下读取吸光度值。
• 计算浓度：根据标准曲线计算样本中TX-A2的浓度。

注意事项

• 该试剂盒仅供科学研究使用，不得用于临床诊断。
• 在使用前需仔细阅读说明书，确保正确操作。
• 保存和使用时应注意温度控制，避免反复冻融。

检测原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被抗凝血素抗体IgM（CPT-IgM）的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并洗涤。用底物TMB显色，TMB在化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的抗凝血素抗体IgM（PT-IgM）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法
1.  血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2.  血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
3.  细胞上清液：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4.  组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
5.  保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品
1.酶标仪（450nm）
2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.37℃恒温箱
操作注意事项
1.  试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
2.  实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
3.  浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释5倍，最终结果乘以5才是样本实际浓度。
4.  严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
5.  所有液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒组成

名称	96孔配置	48孔配置	备注
微孔酶标板	12孔×8条	12孔×4条	无
标准品	0.3mL*6管	0.3mL*6管	无
样本稀释液	6mL	3mL	无
检测抗体-HRP	10mL	5mL	无
20×洗涤缓冲液	25mL	15mL	按说明书进行稀释
底物A	6mL	3mL	无
底物B	6mL	3mL	无
终止液	6mL	3mL	无
封板膜	2张	2张	无
说明书	1份	1份	无
自封袋	1个	1个	无

注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、30、60、120、240、480 μg/mL
试剂的准备
20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份的20×洗涤缓冲液加19份的蒸馏水。
洗板方法
1.  手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。
2.  自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。
操作步骤
1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.  设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3.  样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。
4.  除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置1min，甩去5.洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.  每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。


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