试剂配制:

1、酶联板(Assay plate ):一块(96孔或者48孔)。

2、标准品(Standard):2瓶(冻干品)。

3、样品稀释液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。

4、生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。

5、辣根化物酶标记亲和素稀释液 (HRP-idin Diluent):1×10ml/瓶。

6、生物素标记抗体(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)

7、辣根化物酶标记亲和素(HRP-idin):1×120μl/瓶(1:100)

8、底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。

9、浓洗涤液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。

10、终止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。

试剂准备:

1. 鱼Ⅳ型胶原蛋白(ColⅣ)elisa试剂盒使用前将所有的试剂和标本缓慢均衡至室温(18-25oC),试剂不能直接在37oC溶解。

2. 标准品(冻干品):每瓶标准品加入标准品稀释液1mL,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为2000pg/mL。准备7个稀释标准品的EP管,每个EP管中加入150μL的标准品稀释液,如图所示依次倍比稀释成不同的梯度, 标准品稀释液(0pg/mL)直接作为空白孔。为保证实验结果有效性,每次实验请使用新的标准品溶液。

3. 浓洗涤液:用580mL蒸馏水或去离子水将20mL浓洗涤液稀释至600mL,进行30倍稀释。

优点:

一、、灵敏、特异的抗体;
二、稳定的重复性和可靠性;
三、吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相载体;
四、适用血清、血浆、组织匀浆液、细胞培养上清液、尿液等等多种标本类型;
五、性价比非常好,节省实验经费。
安全性
1)避免直接接触停止液和底物A、B。一旦接触到这些液体,请赶快用水冲刷。
2)实验中不要吃喝、抽烟或运用化妆品。
3)不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。

（酶联免疫吸附测定）的基本使用方式可以概括为以下几个步骤：
1.样品准备：- 收集样本，如血液、组织、细胞培养上清液等。
- 按照试剂盒的指示处理样本，如离心、过滤、稀释或沉淀。
2. 标准曲线：- 准备标准品：按照试剂盒提供的浓度梯度稀释标准溶液。
- 在微孔板的多个孔中加载标准品，通常是双倍稀释系列。
3. 预包被： - 微孔板通常预先包被有特抗体，用于捕捉待测物质。
4. 样品加载：- 在微孔板的孔中加载样品和空白对照。
5. 封闭：- 可能需要添加封闭剂以减少非特结合。
6. 孵育：- 将微孔板在室温或37°C下孵育一段时间，让待测物质与包被抗体结合。
7. 洗涤：- 清洗微孔板以去除未结合的物质。
8. 添加酶标记的抗体：- 加入酶标记的抗体，它可以与步结合的抗原结合.
9. 再次孵育：- 让酶标记的抗体与抗原结合。
10. 洗涤：- 清洗微孔板以去除未结合的酶标记抗体。
11. 添加底物溶液：- 加入底物，底物在酶的作用下会发生颜色变化。
12. 孵育：- 允许颜色发展到稳定的程度，时间根据试剂盒说明确定。
13. 终止反应：- 加入终止液，停止颜色变化并稳定结果。
14. 读取吸光度：- 使用酶标仪在特定波长（通常450nm，有时405nm或630nm）下读取吸光度。
15. 数据分析：- 根据标准曲线计算样品中待测物质的浓度。

鱼Ⅳ型胶原蛋白(ColⅣ)elisa试剂盒服务承诺：

一、产品质量保证,有问题免费包换；

二、提供免费代测服务(为客户提供来样检测服务,限度实验结果的有效性)；

三、提供全程技术指导。

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