1. - 收集样本，通常是血液样本，离心分离血清或血浆。
- 根据试剂盒说明，可能需要对样本进行稀释或特殊处理。
2. - 根据试剂盒提供的浓度梯度稀释标准溶液。
3. - 微孔板预先包被有特抗体，用于捕获1,25(OH)2D3。
4. - 在微孔板的孔中加载标准品、质控品和待测样本。
5. - 可能需要添加封闭剂以减少非特结合，然后在室温或37°C下孵育一段时间。
6. - 清洗微孔板以去除未结合的物质。
7. - 加入酶标记的抗体，该抗体能与1,25(OH)2D3结合。
8. - 让酶标记的抗体与1,25(OH)2D3结合。
9. - 再次清洗微孔板以去除未结合的酶标记抗体。
10. - 加入底物溶液，底物在酶的作用下会变为可见的颜色。
11. - 允许颜色发展到稳定的程度，时间根据试剂盒说明确定。
12. - 加入终止液，停止颜色变化并稳定结果。
13. - 使用酶标仪在特定波长（通常450nm，有时405nm或630nm）下读取吸光度。
14. - 根据标准曲线计算样品中1,25(OH)2D3的浓度。
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